1

1-1- معرفی ویروس بی بذزی گوجه فرنگی 11-2- بررسی دامنه میزبان­های طبیعی و علائم ویروس بی بذری گوجه فرنگی 21-2-1- میز بان­های اولیه 21-2-1-1-گل داوودی 21-2-1-1-1- علائم ویروس بی بذزی گوجه فرنگی بر روی گیاه داوودی 31-2-1-1-2- دیگر ویروس های داوودی 31-2-1-2- گیاه گوجه فرنگی 31-2-1-2-1- علائم ویروس بی بذری گوجه فرنگی بر روی گیاه گوجه فرنگی 41-2-1-2-2- دیگر ویروس های گوجه فرنگی 41-2-2- میزبان های ثانویه ویروس بی­بذری گوجه فرنگی 41-2-2-1- خانواده Compositae 41-2-2-1-1-گل آهار 41-2-2-2- خانواده Solanaceae 41-2-2-2-1-گیاه فلفل 51-2-2-3- خانواده Iridaceae 51-2-2-3-1- گل گلایول 5-2-2-3-2- گل سنبل 61-2-2-4- خانواده Tropaeolaceae 61-2-2-4-1- گل لادن 61-2-2-5- خانواده Cannaceae 61-2-2-5-1- گل اختر 71-2-2-6- خانواده Liliaceae 71-2-2-6-1- گل سوسن 71-2-2-7- خانواده Lamiaceae 71-2-2-7-1- گیاه نعناع 71-2-2-8- خانواده Leguminosae 71-2-2-8-1- گیاه لوبیا 81-2-2-9- خانواده Chenopodiaceae 81-2-2-9-1- گیاه اسفناج 81-2-2-10- خانواده Campanulaceae 81-2-2-3-10- گل استکانی 91-3- اهداف تحقیقفصل دوم: مروری برمنابع 102-1- جایگاه ویروس بی بذری گوجه فرنگی در طبقه بندی ویروس­های گیاهی 102-2- جنس کوکوموویروس 102-2-1- ویژگی های ویریون 112-2-2- ویژگی های ژنو 122-2-3- عملکرد پروتئین ها در جنس کوکوموویروس 122-2-3-1- پروتئین 1a 122-2-3-2- پروتئین 2a 132-2-3-3- پروتئین 2b 142-2-3-4- پروتئین 3a 142-2-3-5- پروتئین پوششی (CP) 152-3- ویروس بی­بذری گوجه فرنگی در جهان 162-3-1- سازماندهی ژنوم ویروس بی­بذری گوجه فرنگی 162-3-2- آر.ان.ای­های ژنومی 162-3-2-1- قطعه RNA-1 172-3-2-2- قطعه RNA-2 182-3-2-3- قطعه RNA-3 182-3-3- آر.ان.ای­های زیر­ژنومی 192-4- دامنه میزبانی و علائم ویروس بی­بذری گوجه فرنگی 192-4-1- دامنه میزبانی ویروس بی­بذری گوجه فرنگی بر روی گیاهان آزمون 192-4-2- گیاهان تشخیصی ویروس ویروس بی­بذری گوجه فرنگی 202-4-3-گیاهان تکثیری ویروس بی­بذری گوجه فرنگی 202-5- تفاوت­های ویروس بی­بذری گوجه فرنگی و ویروس موزائیک خیار 212-6 – روش­های انتقال ویروس بی­بذری گوجه فرنگی 212-6-1- انتقال با حشره ناقل 212-6-2- انتقال با بذر 212-6-3- انتقال با سس 212-7- سرولوژی 222-8- ویژگی های فیزیکی و فیزیوشیمیایی 222-9- مکانیزم ایجاد بی بذری توسط ویروس بی­بذری گوجه فرنگی 232-10- زیان های اقتصادی توسط ویروس بی­بذری گوجه فرنگی 232-11- نقش پروتئین حرکتی ویروس بی­بذری گوجه فرنگی در بروز علائم 242-12- نقش پروتئین پوششی ویروس بی­بذری گوجه فرنگی در ایجاد آلودگی سیستمیک در گیاه 252-13- هیستولوژیفصل سوم: مواد و روش­ها 263-1- نمونه برداری 263-2- آزمون الایزا 263-2-1- مراحل الایزای ساندویچ دو طرفه 273-2-2- بافرهای مورد استفاده در آزمون های الایزا 293-3- تعیین دامنه میزبانی ویروس بی­بذری گوجه فرنگی و مطالعات گلخانه ای 293-3-1- بافر فسفات 1/0 مولار 7 pH= 303-4- مطالعات مولکولی 303-4 -1- استخراج Total RNA با بهره گرفتن از کیت High pure viral nucleic acid kit 313-4-2- آزمون واکنش زنجیره ای پلیمراز به روش نسخه برداری معکوس 313-4-2-1- مرحله سنتز cDNA 323-4-2-2- مراحل آزمون PCR 323-4-3- آغازگرهای اختصاصی مورد استفاده جهت تکثیر ژنوم جدایه ایرانی ویروس بی­بذری گوجه فرنگی 323-4-4- الکتروفورزافقی 333-4-4-1- مواد لازم جهت تهیه بافر TBE 333-4-4-2- آماده سازی نشانگر مولکولی 333-5- همسانه سازی و تعیین توالی قطعات مختلف ژنوم جدایه ایرانی ویروس بی­بذری گوجه فرنگی مجزا شده از گیاه اطلسی (Ker.Mah.P) و ژن پروتئین پوششی جدایه مجزا شده از گیاه داوودی (Ker.Ker.Ch.1) 343-5-1- قراردادن قطعه DNA موردنظر درون ناقل (Ligation) 343-5-1-1- خالص سازی محصول پی.سی.آر با بهره گرفتن از کیت (High Pure PCR Product Purification Kit) 343-5-1-2- استخراج از ژل با بهره گرفتن از کیت Agarose Gel DNA Extraction Kit 353-5-2- مراحل آماده سازی باکتری جهت عمل ترنسفورماسیون (Transformation) 353-5-2-1- کشت باکتری Escherichia coli بر روی محیط کشت جامد (Luria Bertani)  LB 363-5-2-2-کشت باکتری E.coli در محیط مایع C-medium 363-5-2-3- تهیه سلول های مستعد (competent cell) باکتری E.coli 373-5-3- انتقال پلاسمید نوترکیب به درون باکتری E.coli (Transformation) 373-5-4- محیط کشت جامد حاوی آمپی سیلین، IPTG و X-gal 383-5-5- انتخاب پرگنه جهت استخراج پلاسمید نوترکیب 383-5-6- استخراج پلاسمید نوترکیب از باکتری توسط روش Boiling: 393-5-7- استخراج پلاسمید نوترکیب از باکتری توسط High Pure Plasmid Isolation Kit, 403-5-7-1- مواد تشکیل دهنده بافرهای استفاده شده در استخراج پلاسمید 403-5-8- هضم آنزیمی پلاسمید (Digestion) 413-5-9- انجام الکتروفورز جهت بررسی صحت انجام عمل هضم آنزیمی پلاسمید و همسانه سازی 413-6- نگهداری باکتری حاوی پلاسمید نوترکیب 413-7- آماده سازی نمونه ها به منظورتعیین توالی نوکلئوتیدی 413-8- تعیین ترادف ژنوم کامل جدایه ایرانی ویروس بی­بذری گوجه فرنگی مجزا شده از گیاه اطلسی (Ker.Mah.P) و ژن پروتئین پوششی جدایه مجزا شده از گیاه داوودی (Ker.Ker.Ch.1) و مقایسه آن­ها با سایر جدایه های موجود در بانک ژنفصل چهارم: نتایج 434-1- شناسایی و معرفی ویروس بی بذری گوجه فرنگی در ایران 434-1-1- علائم جدایه های شناسایی شده 434-1-1-1- جدایه اطلسی (Ker.Mah.P) 434-1-1-2- جدایه داوودی (Ker.Ker.Ch.1) 444-2- تعیین دامنه میزبانی جدایه­های ایرانی ویروس بی­بذری گوجه فرنگی 444-2-1- بررسی علایم ایجاد شده بر روی گیاهان مایه زنی شده خانواده Solanaceae 444-2-1-1- علائم ایجاد شده بر روی میزبان های طبیعی ویروس بی­بذری گوجه فرنگی 444-2-1-1-1-گیاه گوجه فرنگی 444-2-1-1-2- گیاه فلفل 454-2-1-1-3- گل اطلسی 454-2-1-2- علائم بر روی میزبان های آزمایشگاهی ویروس در خانواده Solanaceae 454-2-1-2-1- گیاه توتون Nicotiana glutinosa L. 454-2-1-2-2- گیاه توتون Nicotiana Clevelendii Gray. 464-2-1-2-3- گیاه توتون Nicotiana tabacum L. cv. Whiteburly 464-2-1-2-4- گیاه توتون Nicotiana debneyii L. 464-2-1-2-5- گیاه توتون Nicotiana tabacum var Samsun NN.   464-2-1-2-6- گیاه توتون Nicotiana tabacum L. cv. Turkish 464-2-1-2-7- گیاه داتوره.Datura maxima L 474-2-1-2-8-گیاه داتوره.Datura stramonium L 474-2-2- بررسی علایم ایجاد شده بر روی گیاهان مایه زنی شده خانواده Compositaeae 474-2-2-1- گل داوودی 474-2-2-2- گل آهار 484-2-2-3- گل آفتابگردان زینتی 484-2-3- بررسی علایم ایجاد شده بر روی گیاهان مایه زنی شده خانواده Chenopodiaceae 484-2-3-1- گونه­ های کنوپودییوم 484-2-3-2- گیاه اسفناج 484-2-4- بررسی علایم ایجاد شده بر روی گیاهان مایه زنی شده خانواده Cucurbitaceae 494-2-4-1- گیاه خیار رقم Peto Seed 494-2-5- بررسی علایم ایجاد شده بر روی گیاهان مایه زنی شده خانواده Leguminosae 494-2-5-1- گیاه لوبیا چشم بلبلی رقم مشهد 494-2-5-2- گیاه لوبیا سبز رقم Sunrise 494-3- استخراج Total RNA و آزمون RT-PCR 504-4- همسانه سازی قطعات تکثیر شده ژنوم جدایه های ایرانی ویروس بی بذری گوجه فرنگی 514-5- تعیین ترادف طول کامل ژنوم جدایه Ker.Mah.P و تعیین جایگاه تکاملی جدایه­های ایرانی ویروس بی­ بذری گوجه فرنگیفصل پنجم: بحث 525-1- بحث 60منابع مورد استفاده

– معرفی ویروس بی بذزی گوجه فرنگی

      ویروس بی بذری گوجه فرنگی[1] ویروسی است از خانواده بروموویریده[2] و جنس کوکوموویروس[3] که برای نخستین بار در سال 1939 توسط Ainsworth از روی گیاه داوودی و در سال 1949 از روی گیاه گوجه فرنگی توسط Blencowe و Caldwell گزارش گردید. ویروس بی بذری گوجه فرنگی گسترش جهانی داشته و در کشت­های داوودی ایجاد آلودگی نموده در حالیکه در کشت های گوجه فرنگی کمتر یافت می گردد (Hollings & Stone, 1970). پیکره­ها­ی TAV ایزومتریک به قطر حدودا 30 نانومتر و ژنوم ویروس متشکل از سه قطعه آر.ان.ای تک رشته ای[4] مثبت و چهار قطعه آر.ان.ای زیر ژنومی[5] می باشد (Shi et al., 1997). هر یک از قطعات کد کننده پروتئین های متفاوتی­اند. RNA-1 دارای یک ORF[6] بوده که پروتئین 1a راکد می نماید. RNA-2 و RNA-3 هر کدام دارای دو ORF بوده و به ترتیب پروتئین های 2a، 2b، 3a و 3b را کد می­نمایند. این ویروس به راحتی توسط تعداد زیادی از گونه های شته خانواده آفیدیده[7] از جمله شته سبز هلو[8] به شیوه ناپایا منتقل می­گردد. همچنین این ویروس از طریق مایه زنی، پیوند و بذر هم قابل انتقال می­باشد (Raj et al.,2011; Hollings & Stone, 1970).

1-2- بررسی دامنه میزبان­های طبیعی و علائم ویروس بی بذری گوجه فرنگی

1-2-1- میز بان های اولیه

1-2-1-1-گل داوودی[9]

      داوودی مهمترین گل شاخه بریده[10] دنیا می باشد که به دلیل گل­های زیبا در رنگ، شکل و اندازه­ های متنوع مورد توجه می­باشد. این گیاه از خانواده کمپوزیته[11] و بومی آسیا و کشور چین بوده که بیش از 200 گونه دارد. در بین گونه­ ها ارقام یکساله، چند ساله و درختچه­های کوچک و بوته ای وجود دارند. گل­های بریده داوودی، عمر گلدانی بیشتری نسبت به سایر گل­های بریده دارند که دلیل آن را تولید کم اتیلن در طی پیری می دانند. داوودی از طریق قلمه، تقسیم بوته و بذر ازدیاد می گردد که در بین این روش ها متداول ترین روش افزایش از طریق قلمه ها می باشد (قاسمی و کافی، 1384).

      گیاه داوودی میزبان اصلی ویروس TAV محسوب می­گردد و این ویروس نیز مهمترین عامل خسارت­زای این گیاه در دنیا می­باشد (Choi et al.,2001). بعد از اولین گزارش در مورد آلودگی گل­های داوودی توسط ویروس TAV (1939) این ویروس از نقاط مختلف کشت های داوودی در دنیا گزارش گردیده است (Hollings & Stone, 1970). مهمترین زیان وارده توسط TAV در این گیاه بدشکلی و نابودی گل و گلبرگ ها می­باشد (Raj et al., 2009).

1-2-1-1-1– علائم ویروس ویروس بی بذری گوجه فرنگی بر روی گیاه داوودی

      مهمترین علائم ایجاد شده توسط TAV بر روی گیاه داوودی شامل کاهش اندازه و رشد، ظاهر نامنظم یا بدشکل، ابلقی شدن برگ ها، لوله ای شدن و شکستگی رنگ یا رنگ پریدگی گلبرگ ها می باشد. علائم در گل ها متفاوت می باشد و آلودگی در فصل اول تنها بخشی از گل ها را تحت تاثیر قرار داده، اما در فصول بعدی تقریباً تمامی گل ها علائم شدیدتری را نشان می دهند (شکل های 1-1 و 1-2). این ویروس نه تنها بین واریته ها و گیاهان مختلف همان واریته، بلکه بین قلمه های حاصل از یک پایه و گل های روی یک گیاه نیز علائم متفاوتی ایجاد می نماید. بعلاوه اینکه ویروس TAV علائم تولید شده توسط سایر ویروس های داوودی را نیز تشدید می­ کند (Hollings & Stone, 1970).

1-2-1-1-2– دیگر ویروس های داوودی

1-2-1-2- گیاه گوجه فرنگی[12]

1-2-1-2-1

خرید اینترنتی فایل متن کامل :

 

 پایان نامه و مقاله

– علائم ویروس بی بذری گوجه فرنگی بر روی گیاه گوجه فرنگی

      ویروس TAV در سال 1949 با علائم کاهش رشد، کوتولگی و ایجاد میوه های بدون بذر از روی گیاه گوجه فرنگی توصیف گردیده است (Blencowe & Caldwell, 1949). در گوجه فرنگی علائم به شکل های متفاوتی از جمله بد شکلی، عدم تقارن، پیچیدگی برگ ها،کوتولگی گیاه و ممانعت از رشد انتهایی که منجر به بوته ای شدن (جارویی شدن) غیر طبیعی می گردد را شامل می شود. گل ها اغلب تعداد اندکی میوه تولید نموده که بدون بذر می باشند (Hollings & Stone, 1970).

1-2-1-2-2- دیگر ویروس های گوجه فرنگی

      از دیگر ویروس های آلوده کننده ی گوجه فرنگی می توان به ویروس های Potato virus Y (PVY) (Aramburu et al., 2006) ، Cucumber mosaic virus (CMV) (Garcia-Arenal et al., 2000)، Tomato mosaic virus (ToMV) (Zitter & Tasi, 1981)، Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) (Polston et al., 1999)، Tomato spotted wilt virus (TSWV) (Williams et al., 2001)، اشاره نمود.

1-2-2- میزبان های ثانویه ویروس بی­بذری گوجه فرنگی

1-2-2-1- خانواده Compositae

1-2-2-1-1- گل آهار[14]

می باشد. گل آهار یکساله با برگ های نسبتا پهن، دراز و نوک تیز، دارای انواع گل های کم پر و پر پر، گل های درشت و گل های ریز با رنگ های متنوع می باشد. ویروس TAV شبیه به ویروس موزائیک توتون و ویروس موزائیک شلغم باعث ایجاد لکه های کلروتیک و موزائیک بر روی برگ های گل آهار می گردد (Kameya-Iwaki et al., 1996).

1-2-2-2- خانواده Solanaceae

1-2-2-2-1-گیاه فلفل[15]

      فلفل بومی مکزیک، جنوب پرو و بولیوی می باشد و در سراسر جهان تحت شرایط محیطی و آب و هوایی مختلف رشد می کند (پیوست، 1388). TAV از جمله ویروس های آلوده کننده ی فلفل می باشد که ازکشور های مختلف دنیا ازجمله ژاپن، مجارستان، هلند و نیوزیلند گزارش گردیده است.علائم ویروس TAV بر روی فلفل شامل ابلقی، کلروز، موزائیک، تاولی و بد شکلی در برگ ها و تولید گل ها و میوه های بدون بذر می باشد. همچنین از دیگر علائم ویروس بر روی فلفل می توان به علائم موسوم به Calico (ابلقی زرد) در برگ ها اشاره نمود .(Salamon et al., 1976; Procter 1975)

1-2-2-3- خانواده Iridaceae

1-2-2-3-1- گل گلایول[16]

1-2-2-3-2- گل سنبل[17]

      سنبل از جمله گیاهان زینتی می باشد که توسط ویروس TAV آلوده می گردد (Shu Xui-zhen et al., 1986). سنبل بومی مناطق مدیترا نه ای بوده و Hyacinthus orientalis مهمترین گونه آن می باشد. این گونه دائمی و سوخ دار بوده که سوخ ها چندین سال دوام داشته و هر ساله رشد و نمو می نماید. گلکاران ایران سنبل را از نظر گل آذین به دو دسته پارسی و هندی تقسیم می نمایند. در سنبل پارسی گل های گل آذین کمتر و فاصله ی آن ها زیاد بوده در حالیکه در سنبل هلندی گل ها به صورت متراکم بر روی سا قه قرار دارند (قاسمی و کافی، 1384). آلودگی گیاهان سنبل به ویروس TAV از کشور چین گزارش گردیده است. ویروس TAV باعث ایجاد علائم موزائیک در برگ ها و لکه های نکروتیک سیاه رنگ بر روی سوخ های[18] گیاه  می گردد (Shu Xui-zhen et al., 1986).

 1-2-2-4- خانواده Tropaeolaceae  

1-2-2-4-1- گل لادن[19]

1-2-2-5- خانواده Cannaceae

1-2-2-5-1- گل اختر[21]

1-2-2-6- خانواده Liliaceae

1-2-2-6-1- گل سوسن[22]

      سوسن عضو خانواده ی لیلیاسه بوده که دارای 294 جنس و 4500 گونه گیاهی می باشد. سوسن جزء ده گل درآمد زای صنعت گل در دنیا می باشد (قاسمی و کافی، 1384). این گیاه نیز شبیه دیگر گل ها و گیا هانی که به روش غیر جنسی تکثیر می گردند در معرض آلودگی بیماری های ویروسی می باشد (Pearson et al., 2009). ویروس TAV از جمله ویروس های آلوده کننده ی گل سوسن بوده که سبب ایجاد موزائیک بر روی برگ ها می گردد (Hollings & Stone, 1970). از دیگر ویروس های آلوده کننده ی ای گیاه می توان به Lily mottle virus (LMoV)، Lily symptomless virus (LSV) و Cucumber mosaic virus (CMV) اشاره نمود،که سبب ایجاد لکه های کلروتیک، شکستگی رنگ گل ها و برگ ها، ایجاد نقاط قهوه ای بر روی غده و به طور کلی کاهش رشد و اندازه در گیاه می گردند (Pearson et al., 2009).

1-2-2-7- خانواده Lamiaceae

1-2-2-7-1- گیاه نعناع[23]

1-2-2-8- خانواده Leguminosae

1-2-2-8-1- گیاه لوبیا[24]

      لوبیا بیش از چهار سده است که در سراسر جهان مصرف می‌شود. این گیاه درسال ۱۵۳۳ میلادی از آمریکا به اروپا منتقل و از آنجا به سایر نقاط جهان راه یافت. لوبیا با نام انگلیسی Common Bean  از خانواده بقولات می باشد. جنس Phaseolus spp. از این خانواده بیش از پنجاه گونه گیاهی را شامل می شود که این گونه‌ها از نظر شكل بوته، طول، غلاف، تعداد دانه در غلاف و اندازه دانه با هم متفاوت می‌باشند (پیوست، 1388). ویروس TAV از جمله ویروس های آلوده کننده ی لوبیا می باشد که از مزارع کشور چین گزارش گردیده است. علائم TAV بر روی گیاه لوبیا شامل موزائیک همراه با ایجاد لکه های کلروتیک، روشن و رنگ پریدگی، کوتولگی و بدشکلی در برگ ها می باشد (شکل 1-4)(Shu Xui-zhen et al., 1986) .

 


 
موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت


فرم در حال بارگذاری ...